Картина главных структур возбудителей вич

Определение часто проводят в лунках 96-луночных микропанелей. Суть метода в том, что в реакционную смесь вносят специальную ДНК-затравку — полирибоаденозин-олигодезоксириботими- динх12-18 и меченый тритием тимидин-трифосфат.

На такой затравке клеточные ДНК-полимеразы не способны синтезировать комплементарные полинуклеотидные молекулы. Затравка выпускаются как коммерческий препарат, например фирмой Pharmacia P-U Biochemicals, Piscataway, NJ. Зато RT способна синтезировать с этой затравки ДНК по матрице РНК. Опишем кратко этапы методики Monroe J. E. et al.1987 1 В лунки или пробирки наливают по 50 мкл разводящего буфера следующего состава 0. 05 М Tris-HCl рН 7. 8, 0. 1 М хлорида натрия, 0. 15 мгмл дитиотреитола, 0. 1 Triton Х-100; 2 Туда же вносят по 5-15 мкл испытуемого биоматериала; 3 Вносят по 50 мкл реакционной смеси для определения активности RT следующего состава 1 М Tris-HCl, 3 М КС1, 0. 15 М MgC12, 10 Triton Х-100, затравка полиА-олиго1Тх12-18 — 25 мгмл, меченый предшественник ЗН-дезокси-тимидин-трифосфат — 1 мккюри 10-20 Cimol; 4 Все вместе инкубируют 1 час при 37С. 5

Реакцию останавливают добавлением 25 мкл 50 мМ ЭДТА с 100 мкгмл холодной ДНК. 6 По 50 мкл содержимого из каждой лунки раскапывают на нитроцеллюлозную мембрану. Мембрану тщательно отмывают сначала в смеси 5 ТХУ с 5 пирофосфата натрия, затем в смеси 5 ТХУ с 50 этанола; 7 Фиксированную на фильтрах радиоактивность подсчитывают на бета- счетчике и величину числа импульсов в минуту срт рассматривают как количественную оценку ферментативной активности обратной транскриптазы.

Сегодня ремонт iphoneвы можете провести на macremont.com.ua.

 
Статья прочитана 45 раз(a).
 

Еще из этой рубрики:

 

Последние Твитты

Loading

Архивы

Наши партнеры

Читать нас

Связаться с нами

Наши контакты

Тел.      

Skype  

ICQ