Картина приоритетных свойств возбудителей вич

В растворе натрия хлорида, выдерживают при 0С в течение 18 часов, после чего центрифугируют при 800 g 45 минут при 4С.

Осадок собирают и ресуспендируют его в 25 мкл 50-го раствора глицерола с 25 мМ Tris-HCl рН 7. 8 и 5 мМ дитиотреитола, 50 мМ КС1, 0. 025 Triton Х-100. Для разрушения вирусных частиц к пробе объемом 25 мкл добавляют 12. 5 мкл 0. 9 Triton Х-100 в 1. 5 М КС1. Из такой смеси на анализ берут 2. 5 мкл и добавляют к ним 22. 5 мкл вышеназванной реакционной смеси для определения активности RT. Для контроля на активность клеточных ДНКП используют затравку поли1А-олиго1Тх12-18. Положительным результатом, свидетельствующим о наличии RT в испытуемом материале, принято считать значения числа импульсов в минуту, не меньшие 3-х фоновых значений, при условии, что фоновые значения не превышают 2000 сртмл.
ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ РЕГИСТРАЦИИ ИНФЕКЦИИ ВИЧ В КЛЕТКАХ

Такая регистрация возможна потому, что по ходу репликации ВИЧ в клетках часть транслированных вирусных белков экспрессируется в виде отдельных белков антигенов на поверхности клеточной мембраны. Поэтому, если клетки обработать специфическими антителами против вирусных белков и затем анти-антителами, конъюгированными с флюорохромами, то флюоресцировать будут только инфицированные клетки.

Если метод регистрации — микроскопия, то анализ проводят, например, следующим образом. Испытуемые клетки осаждают, отмывают, раскапывают суспензию на предметные стекла, сушат на воздухе, фиксируют ацетоном или смесью ацетона с метанолом 11. Затем препарат на предметных стеклах инкубируют с раствором специфических антител в PBS с 1 БСА в течение 20 минут, отмывают трижды в PBS инкубируют с проявляющим реагентом — конъюгатом анти-глобулинов с флюорохромом — в течение 20 мин.

 
Статья прочитана 76 раз(a).
 

Еще из этой рубрики:

 

Последние Твитты

Loading

Архивы

Наши партнеры

Читать нас

Связаться с нами

Наши контакты

Тел.      

Skype  

ICQ